核酸检测流程
1.首先,医务人员会用咽拭子擦拭受试者的鼻腔或咽喉扁桃体,收集唾液分泌物,这实际上是相当痛苦的。
2.采集人体分泌物后,将咽拭子浸泡在保存液中,拧紧试管盖保存样本。
3.然后,将样品放入干净的密封袋中,密封,送到相关部位进行检测。
4.相关部门会将样本送到指定实验室进行核酸提取实验。
5.提取核酸后,用荧光PCR检测是否有扩增反应,即判断是阴性还是阳性。
6.最后根据核酸检测荧光PCR反应的结果,得到核酸检测报告,我就可以查询结果,从而完成核酸检测过程。
核酸检测流程是什么?
1、核酸提取采用硅胶柱离心法、磁性硅胶颗粒分离法和自动化仪器等商业试剂或设备并按说明书进行。
提取RNA时要注意防止RNA降解。
DNA应保存在-20,RNA和长期DNA应保存在-80。
LIfE54。zHiLi123。com2.逆转录合成cDNA。
反转录cDNA合成反应需要反转录引物、dNTPs、反转录酶、RNase抑制剂、DTT、缓冲液、适量不含RNA/dnase和RNA模板的超纯水。
逆转录反应在放大器或水浴中在特定的温度和时间下进行。
3.PCR扩增反应PCR反应需要引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液、适量的超纯水,不需要RNA/DNA酶和模板。
在放大器中,根据设定的程序进行放大。
一种使用二次扩增的巢式聚合酶链反应扩增方法。
4.扩增产物的定性分析;扩增产物常用的分析方法是琼脂糖凝胶电泳,与分子量标准进行比较,判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。
扩增产物的其他分析方法包括限制性内切酶分析、特异性探针杂交分析和DNA序列分析。
5.结果判断和完成报告:每次试验应同时进行两个阳性对照和两个阴性对照。只有当阳性对照扩增出预期片段,阴性对照没有扩增出任何片段,并且两个平行样本的结果一致时,才能做出核酸阳性或阴性反应结果的判断。
核酸检测具体步骤
1、核酸提取采用硅胶柱离心法、磁性硅胶颗粒分离法和自动化仪器等商业试剂或设备并按说明书进行。
提取RNA时要注意防止RNA降解。
DNA应保存在-20,RNA和长期DNA应保存在-80。
2.逆转录合成cDNA。
反转录cDNA合成反应需要反转录引物、dNTPs、反转录酶、RNase抑制剂、DTT、缓冲液、适量不含RNA/dnase和RNA模板的超纯水。
逆转录反应在放大器或水浴中在特定的温度和时间下进行。
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3.PCR扩增反应PCR反应需要引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液、适量的超纯水,不需要RNA/DNA酶和模板。
在放大器中,根据设定的程序进行放大。
一种使用二次扩增的巢式聚合酶链反应扩增方法。
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4.扩增产物的定性分析;扩增产物常用的分析方法是琼脂糖凝胶电泳,与分子量标准进行比较,判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。
扩增产物的其他分析方法包括限制性内切酶分析、特异性探针杂交分析和DNA序列分析。
LIfE54。zHiLi123。com5.结果判断和完成报告:每次试验应同时进行两个阳性对照和两个阴性对照。只有当阳性对照扩增出预期片段,阴性对照没有扩增出任何片段,并且两个平行样本的结果一致时,才能做出核酸阳性或阴性反应结果的判断。
扩展数据:检测新型冠状病毒特异性序列最常用的方法是荧光定量聚合酶链反应。
由于聚合酶链反应的模板只有脱氧核糖核酸,新型冠状病毒核酸在聚合酶链反应前需要反转录成脱氧核糖核酸。
在聚合酶链反应中
当探针完成时,报告基团发出的荧光信号被淬灭基团吸收。如果反应体系中存在靶序列,在PCR反应过程中探针会与模板结合,探针会被DNA聚合酶利用酶的核酸外切酶活性沿着模板进行消化降解,报道基团会从淬灭基团中分离出来发出荧光。
每一条脱氧核糖核酸链都被扩增,产生一种荧光分子。
荧光定量PCR仪可以监测到荧光达到预设阈值的循环次数与病毒核酸浓度有关,病毒核酸浓度越高,Ct值越小。
不同厂家的产品会根据自己产品的性能来决定自己产品的正向判断值。
LIfE54。zHiLi123。com参考:百度百科——核酸检测方法。